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微藻培养中容器、用具和海水等的消毒或灭菌处理方法
发布时间: 2004-2-16 信息来源:
    在微藻培养中,对各种容器、用具和海水等进行消毒或灭菌处理,是最基本的一项操作程序,稍有疏忽就会引起藻种混杂、原和一动物滋生、造成整个培养工作的失败,因此必须引起足够的重视。
  消毒和灭菌是两个不同的概念。灭菌通常作用于全过程,保证所有的微生物全部失活——杀菌作用;而消毒则意味着使细菌等微生物数目减少到一个较为“安全”或“可以接受”的水平——抑菌作用,在实验室中一般均要求进行灭菌操作,而在生产中一般进行消毒程序就可以,在微藻培养中主要的灭菌和消毒方法有三大类。
  (1)高温灭菌法:高温之所以能杀菌,最主要的原因是高温能使蛋白质变性或凝固,微生物体内蛋白质含量很高,收于高温促使微生物的蛋白质变性,同时也破坏了酶的活性,从而杀死微生物,具体做法有如下四种:
  A.烧灼灭菌法:是利用酒精灯等的火焰直接把微生物烧死的方法。此法灭菌彻底可靠,并且杀菌迅速,但使用范围有限,体积大的、不耐烧灼的东西都不适用,接种针、接种环、镊子、玻璃棒及试管口等均可用火焰灭菌。
  B.干热灭菌法:是在烘箱中利用热空气灭菌的方法。一般微生物的营养细胞在100摄氏度下干热1.5小时即被杀死。芽孢则需要在140℃下3小时才被消灭如再将温度升高,灭菌时间就可缩短。通常将烘箱内的温度保持160℃,1小时即可杀死所有的微生物和芽孢,玻璃器皿,金属用具及其他耐高温的物品均可使用此法灭菌,其优点是灭菌彻底,并且使各种被灭菌物品保持干燥状态。
  C.煮沸灭菌法:直接将需要灭菌的物品放在水中煮沸15-20分钟,即可杀死所有的细菌营养细胞,煮沸1-2小时可杀死所有的芽孢,实验室里用的不第水,大都是用煮沸法灭菌的。
  D.压热灭菌法:是将被灭菌物品装入灭菌釜中,由于在密闭的容器中加热,蒸汽不外溢,汽压升高,范汽的穿透力加大,当温度达到121℃(灭菌釜内汽压达15磅/平方英寸)时,连续15-20分钟,即可杀灭所有的微生物的营养细胞和芽孢,这方法适用于不怕高热的物品,如培养液的母液、琼脂培养基、过滤海水、耐热的试剂及玻璃器皿等。有些培养液母液在高热时易发生沉淀,可用112℃,8磅/平方英寸灭菌20-30分钟。
  (2)化学药物消毒法:利用化学药品来杀死全部或部分微生物的作用称为消毒,用来消毒的药品叫消毒剂,用于微藻培养的消毒法主要有如下四种:
  A.加氯消毒法:主要用于生产中的海水消毒,以往常用漂白粉(次氯酸钙)处理海水,因其杂质多,易沉淀,操作麻烦等缺点,所以现普遍采用高效漂粉精片或工业用次氯酸钠溶液,氯和次氯酸钠等都具有间接的氧化作用,氧化电势0.94,在水中能产生新生态氧,这种新生态氧能破坏微生物体内的酶,具有强烈的杀菌作用,每立方米海水中加入次氯酸钠溶液(含有效氯8%)8125毫升,经8小时通气搅拌处理加硫代硫酸钠17克,中和余氯后,就可在这种海水中施肥,进行接种培养,此法的优点是价廉,操作方便,技术成熟,缺点是对芽孢杀灭效果差,其氯化物有害,使海水致色,致臭。
  B.臭氧消毒法:臭氧是呈游离状态的强氧化剂,氧化电势高达2.07,能快速、有效地杀灭细菌营养细胞和芽孢,也是色、味、臭的去除剂,其氧化产物无毒,不会产生二次污染,是一种较理想消毒方法,利用臭氧发生器,每吨海水通入10克臭氧,在5-10分钟内就能达到消毒的目的。
  C.高锰酸钾消毒法:高锰酸钾是一种强烈的氧化剂,氧化电势1.67,所以也是一种高效消毒剂。主要用于生产中培养池的消毒,其他像塑料桶、勺及薄膜等也用高锰酸钾来消素,方法是将洗净的容器或工具放在5乘10-6的高锰酸钾溶液中浸泡5分钟然后用消毒过的水反复冲洗干净,培养池可用高锰酸钾溶液在池壁,池底反复淋洒,再用消毒水冲洗干净。
  D.来苏儿消毒法:来苏儿是甲酚与肥皂的混合物,主要破坏生物细胞膜,使蛋白质变性,常用3-5%的溶液消毒实验室的桌面和镊子等器械,在进行无菌操作时也用来洗手消毒。
  (3)辐射消毒法:辐射对于细菌的致死作用是由于细菌细胞原生质含有很多能吸收辐射能量而发生光化学反应的分子,对生物细胞有很大的损害作用。例如紫外线就是一种强有力的杀菌因素。杀菌最有效的光谱区在2.600A左右,也就是核酸最高吸收光谱区,在紫外线照射下,细菌的死亡很可能是因为这些化合物的光反应所致,常用于实验室的无菌室的消毒,现在有一种紫外线消毒器,用于水产养殖的海水消毒,效果较好,缺点是成本高,消毒量小,其他像X 射线、r射线及快中子辐射等对细菌的致死作用是间接的,由于这些射线穿过细菌细胞时,有从水和其他细胞组织形成过氧化物的作用,使用蛋白质变性,酶活性丧失,而使细菌致死,因这些射线穿透力很强,对大型的或其他消毒法办不到的物品,可用这种方法消毒。





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